在中山杉外植體消毒的一系列前期試驗(yàn)中，外植體的污染率都一直居高不下，特別是在2017年9－10月先后進(jìn)行的外植體消毒試驗(yàn)，最終在接種后10d時(shí)都全部污染。通過(guò)試驗(yàn)觀察及查閱文獻(xiàn)資料后推測(cè)，已經(jīng)木質(zhì)化的健壯枝條為外植體其自身帶菌量太多導(dǎo)致消毒不徹底，此次試驗(yàn)充分證實(shí)了上述推測(cè)?？梢钥吹侥举|(zhì)化枝條由于生長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)，長(zhǎng)期暴露在外，加之隨著時(shí)間的推移枝條的皮層縱裂明顯，容易滋生大量雜菌且不易去除；而未木質(zhì)化的枝條，由于暴露在外的時(shí)間較短，加之枝條皮層光滑未曾開(kāi)裂，雜菌不易滋生及附著，因此在消毒過(guò)程中能徹底清除雜菌。觀察中也發(fā)現(xiàn)用0.2%HgCl2處理12min后，外植體啟動(dòng)率 ，且未啟動(dòng)的外植體都出現(xiàn)不同程度的褐化現(xiàn)象，這與HgCl2處理時(shí)間較長(zhǎng)導(dǎo)致腋芽受損重有關(guān)系。

眾所周知，木本植物無(wú)菌體系建立時(shí)外植體消毒技術(shù)很難把控，而目前的資料表明僅唐興國(guó)等開(kāi)展了中山杉外植體消毒試驗(yàn)，但該試驗(yàn)方法其外植體預(yù)培養(yǎng)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，試驗(yàn)效果方面雖然污染率可低至6.7%，但外植體的存活率也降至20%，這在實(shí)際生產(chǎn)上的指導(dǎo)意義不大。本試驗(yàn)外植體消毒試驗(yàn)中，外植體不進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，通過(guò)對(duì)外植體類型、HgCl2濃度及處理時(shí)間進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，其消毒試驗(yàn)結(jié)果甚為理想，在實(shí)際生產(chǎn)上有節(jié)省時(shí)間、可操作性強(qiáng)等實(shí)用價(jià)值。然而采用未木質(zhì)化嫩梢作為外植體，其萌動(dòng)抽生的腋芽質(zhì)量不佳，芽體也較瘦弱，而采用木質(zhì)化的粗壯枝條作為外植體，其抽生的腋芽飽滿壯實(shí)。因此，針對(duì)木質(zhì)化中山杉枝條為外植體探索出一套行之有效的消毒方案，將會(huì)更有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

腋芽啟動(dòng)培養(yǎng)過(guò)程中，6-BA作為細(xì)胞分裂素類物質(zhì)，表現(xiàn)出極為明顯的促進(jìn)作用，在一定濃度范圍內(nèi)能促進(jìn)細(xì)胞分裂，促進(jìn)芽的形成與生長(zhǎng)；而NAA作為生長(zhǎng)素類物質(zhì)，也能明顯促進(jìn)體內(nèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)，但當(dāng)濃度過(guò)高時(shí)則會(huì)抑制芽的產(chǎn)生，當(dāng)6-BA/NAA比值大時(shí)更有利于腋芽啟動(dòng)，李慶偉等也得出過(guò)相似的結(jié)論。但此次研究也發(fā)現(xiàn)在消毒試驗(yàn)中未添加任何植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的情況下，未木質(zhì)化嫩枝的腋芽啟動(dòng)率為90%，但在后續(xù)觀察中發(fā)現(xiàn)幼芽黃綠且瘦弱，實(shí)際應(yīng)用價(jià)值不高；而腋芽啟動(dòng)試驗(yàn)外植體采用的是春季萌生的半木質(zhì)化嫩枝，消毒難度較秋季萌生嫩枝更難，扣除外植體污染樣本數(shù)量后，一定程度上影響了腋芽啟動(dòng)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)，但腋芽啟動(dòng)率仍達(dá)到了87.5%，僅稍低于秋季嫩枝，同時(shí)，腋芽啟動(dòng)試驗(yàn)所獲得的幼芽質(zhì)量極高。因此在后續(xù)的研究工作中，將進(jìn)一步對(duì)中山杉枝條木質(zhì)化程度、枝條萌發(fā)季節(jié)等納入因素進(jìn)一步深入研究。

中山杉無(wú)菌體系的建立尤為重要，特別是外植體的消毒是最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。試驗(yàn)表明外植體以未木質(zhì)化、表皮無(wú)裂紋的新梢為佳，以0.2%HgCl2處理時(shí)間10min為好，接種20d時(shí)外植體污染率為0，且啟動(dòng)率也達(dá)90%。在中山杉啟動(dòng)培養(yǎng)中，腋芽萌動(dòng)集中出現(xiàn)在接種后10~20d，30d時(shí)腋芽便開(kāi)始展葉及伸長(zhǎng)生長(zhǎng)。通過(guò)正交試驗(yàn)得出NAA，6-BA對(duì)其腋芽萌動(dòng)都有促進(jìn)作用，其中6-BA起主導(dǎo)作用，而活性炭則相反，對(duì)中山杉腋芽萌動(dòng)有抑制作用。