1.1材料

試驗(yàn)材料取自2017年濟(jì)南市唐王和長清苗圃采收的大葉女貞種子，選擇顆粒飽滿的種子消毒后剝胚放在墊有濕潤脫脂棉的培養(yǎng)皿中，于25℃組培室中萌發(fā)。

1.2方法

1.2.1染色體制片分別選取大葉女貞根尖和莖尖為材料，在7:00-12:00時間段內(nèi)分次取樣，每隔30min取材1次，確定最適宜的取材時間。材料分別經(jīng)0.02%秋水仙素、0.002mol/L8-羥基喹啉、飽和對二氯苯、冰水處理2～8h，2h為一個梯度，確定最適宜的預(yù)處理液和預(yù)處理時間。預(yù)處理后，蒸餾水漂洗2～3遍后于卡諾式固定液中室溫固定24小時。蒸餾水漂洗2-3遍，分別經(jīng)酶解法和酸解法解離，酸解時間分別為5～25min，5min為一個梯度。酶解法時，選擇有無0.075mol/LKCl低滲液兩組處理，酶解時間分別為90～150min，10min為一個梯度。以確定最適宜的解離方法和時間。解離后，蒸餾水沖洗2～3遍，將材料于載玻片上，濾紙吸干周圍的水分，滴加1～2滴醋酸洋紅或卡寶品紅染液，分別染色5min，15min，25min，以確定 染色時間。染色后，運(yùn)用常規(guī)壓片法和改良去壁火焰干燥法制片。

1.2.2細(xì)胞學(xué)觀察及數(shù)據(jù)分析

選取5～10個植株的新生根尖進(jìn)行核型分析，使用OLYMPUS顯微鏡100倍油鏡進(jìn)行鏡檢并拍照。運(yùn)用AdobePhotoshop圖像處理軟件，對分裂中期的大葉女貞染色體進(jìn)行數(shù)據(jù)測量并計(jì)算染色體組總長度、染色體臂相對長度、臂比、臂指數(shù)、不對稱系數(shù)等參數(shù)。染色體數(shù)目的確定和核型分析參照李懋學(xué)和陳瑞陽關(guān)于植物核型分析標(biāo)準(zhǔn)化建議，參照Levan等的染色體命名規(guī)則描述核型公式；按Arano方法計(jì)算核不對稱系數(shù)；按Kuo等等方法計(jì)算相對長度；按Stebbins方法確定染色體類型。